بررسی تاثیر ایجاد جهش در جایگاه 346 بر روی خصوصیات آنزیم لوسیفراز گونه photinus pyralis با روش جهش زایی هدفدار

thesis
abstract

تبدیل انرژی شیمیایی به نور توسط موجودات زنده از دیرباز توجه محققان را به خود جلب نموده است. این پدیده که به بیولومینسانس معروف است واکنشی آنزیمی می باشد که بواسطه دخالت آنزیم لوسیفراز و سوبسترای لوسیفرین انجام می گیرد. بیشترین مطالعات در زمینه بیولومینسانس بر روی حشره شب تاب آمریکائی (photinus pyralis) انجام شده است. علی رغم کاربردهای فراوان صنعتی و تشخیصی آنزیم لوسیفراز، چندین عامل همچون پایداری پایین لوسیفراز نسبت به حرارت و km بالا برای سوبسترای atp استفاده از آن را محدود کرده است. لوسیفراز حشره شب تاب آنزیمی پراکسیزومی می باشد که طی دو مرحله، مرحله اول با نقش لیگازی با استفاده از atp و mg2+ و مرحله دوم با نقش مونواکسیژنازی و با استفاده از o2 باعث تبدیل سوبسترای خود، لوسیفرین به ترکیب برانگیخته اکسی لوسیفرین می شود که در هنگام برگشت به حالت پایه ایجاد نور با بازده کوانتومی بالا می کند. در ساختار لوسیفراز اسیدآمینه ترئونین 346 تنها آمینواسید می باشد که زوایای دووجهی آن در منطقه غیر مجاز نمودار راماچانداران قرار گرفته است. وجود چنین زوایای دووجهی زنجیره اصلی در ساختار پروتئین ها که از نظر انرژیتیکی نامطلوب هستند کمیاب است و معمولاً با مناطقی از مولکول که نقش عملکردی دارند همراه می باشند. از طرفی مشخص شده است که حذف فشار از ساختار پروتئین ممکن است بر پایداری پروتئین بیافزاید. بنابراین در این پروژه برای بررسی نقش این اسیدآمینه از ورود سه اسیدآمینه گلایسین با زنجیره جانبی کوچک، والین با زنجیره جانبی شبیه ترئونین اما غیرقطبی و پرولین که باعث ایجاد شکستگی در ساختار می شود استفاده شد. ورود این اسیدآمینه ها هیچ تاثیری بر روی طیف نشری نداشت اما پایداری حرارتی برای جهش یافته های t346g و t346v در دمای 30 درجه سانتی گراد افزایش یافته بود. فعالیت ویژه به میزان تقریباً زیادی برای همه ی جهش یافته ها کاهش نشان می دهد.

similar resources

بررسی ایجاد جهش در جایگاه ترئونین 346 و تاثیر آن بر روی خصوصیات لوسیفراز photinus pyralis با استفاده از جهش زایی هدفدار

تبدیل انرژی شیمیایی به نور توسط موجودات زنده از دیرباز توجه محققان را به خود جلب نموده است. این پدیده که به بیولومینسانس معروف است واکنشی آنزیمی می باشد که بواسطه دخالت آنزیم لوسیفراز و سوبسترای لوسیفرین انجام می گیرد. بیشترین مطالعات در زمینه بیولومینسانس بر روی حشره شب تاب آمریکائی (photinus pyralis) انجام شده است. علی رغم کاربردهای فراوان صنعتی و تشخیصی آنزیم لوسیفراز، چندین عامل همچون پایدا...

15 صفحه اول

افزایش پایداری آنزیم لوسیفراز گونه photinus pyralis در برابر هضم پروتئازها با استفاده از روش جهش زایی هدفدار

آنزیم لوسیفراز حشره شب تاب (ec; 1.13.12.7 ) اکسیداسیون لوسیفرین را در حضور یون های منیزیم، atp و اکسیژن مولکولی کاتالیز می کند. لوسیفراز آنزیمی تک زیر واحدی (62 kda) و دارای دو دمین n- ترمینال و c- ترمینال می باشد. این آنزیم، به عنوان ژن گزارشگر در in vivo imaging کاربردهای بسیار زیادی دارد. لوسیفراز در مقابل پروتئازها حساس و به سرعت غیر فعال می شود. تیمار این آنزیم با تریپسین نشان داده است که ...

15 صفحه اول

بررسی اثرات بارهای سطحی آرژنین بر ساختار و عملکرد آنزیم لوسیفراز از طریق جهش زایی هدفدار

لوسیفراز حشره شب تاب یک آنزیم مونواکسیژناز بوده و در حضور atp، لوسیفرین را به لوسیفریل-آدنیلات تبدیل نموده که در یک واکنش چند مرحله ای، به حالت برانگیخته اکسی لوسیفرین تبدیل می شود. با برگشت اکسی لوسیفرین برانگیخته به حالت پایه، تولید نور سبز رنگ می نماید. نور تولید شده توسط این آنزیم، یکی از حساس ترین ابزارهای تشخیص دقیق atp بوده و به منظور اندازه گیری آلودگیهای میکروبی، سنجش گزارشگرهای ژنتیکی...

بررسی اثر تغییر در اسید آمینه جایگاه 300 آنزیم لوسیفراز و بررسی خصوصیات آنزیم با جهش زایی هدف دار

چکیده: پدیده بیولومینسانس تبدیل انرژی شیمیایی به نور توسط موجودات زنده را گویند که واکنشی آنزیمی می باشد که به واسطه دخالت آنزیم لوسیفراز و سوبسترای لوسیفرین انجام می گیرد. لوسیفرازآنزیمی پراکسیزومی می باشد که طی دو مرحله، مرحله ی لیگازی با استفاده از atp و mg2+ و مرحله ی مونواکسیژنازی و با استفاده از o2 باعث تبدیل سوبسترای خود (لوسیفرین) به ترکیب برانگیخته ی اکسی لوسیفرین می شود که در هنگام ب...

15 صفحه اول

بررسی نقش لوپ انعطاف پذیر در مکانیسم ایجاد نور و تاثیر آن بر روی پارامترهای سینتیکی در لوسیفراز photinus pyralis با استفاده از موتاسیون هدفدار

آنزیم لوسیفراز حشره شب تاب در طی دو مرحله، مرحله اول با نقش لیگازی با استفاده از atp و mg2+ و مرحله دوم با نقش مونواکسیژنازی و با استفاده از o2 باعث تبدیل سوبسترای خود، لوسیفرین به ترکیب برانگیخته اکسی لوسیفرین می شود که در هنگام برگشت به حالت پایه ایجاد نور با بازده کوانتایی بالا می کند. در بین حشرات تنها گونه p. hirtus از railrod worms به طور طبیعی دارای بیولومینسانس نشر نور قرمز است. وجود r3...

15 صفحه اول

بررسی اثر فاکتور b بر پایداری آنزیم لوسیفراز تغییر یافته به روش جهش زائی اشباعی و هدفدار

لوسیفراز پروتئینی است که دارای یک دمین بزرگ در انتهای آمین و یک دمین کوچک در انتهای کربوکسیل است. آنالیزهای b-factor نشان دهنده این است که دمین انتهای کربوکسیل لوسیفراز، انعطاف پذیرتر از دمین انتهای آمین می باشد. مطالعه بر روی پروتئین های ترموفیل نشان داده است که پایداری دمائی پروتئین های ترموفیل در نتیجه استحکام ساختاری بیشتر آنها است. در ضمن ارتباط بین انعطاف پذیری، پایداری و عملکرد در اغلب پ...

My Resources

Save resource for easier access later

Save to my library Already added to my library

{@ msg_add @}


document type: thesis

وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه تربیت مدرس - دانشکده علوم زیستی

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023